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濟南免疫親和柱的測定原理和操作流程

更新時間：2021-03-21點擊次數(shù)：1425
 　　濟南免疫親和柱測定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，B1單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠介質(zhì)上，樣品中的經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢通過免疫親和柱，在免疫親和柱內(nèi)，與抗體結(jié)合，洗滌液通過免疫親和柱除去未被結(jié)合的雜質(zhì)。采用甲醇洗脫，然后進(jìn)行相關(guān)分析。
 
　　濟南免疫親和柱的操作流程：
　?、贅悠诽幚恚簠⒄崭鞣?，對樣品進(jìn)行處理。
 
　?、趦艋?/div>
　?。?）柱子預(yù)處理：取出免疫親和柱，恢復(fù)至室溫，將上端塞子取出，打開下端堵頭，將柱內(nèi)保存液流掉至高于凝膠上界面3-5mm處，停止流液（或?qū)⒚庖邔游鲋苯舆B接于20ml注射器下）。
 
　　（2）加樣：加入處理好的樣品液10ml，打開下端堵頭，調(diào)節(jié)流速至1-2滴/秒，直至空氣進(jìn)入親和柱中，棄去流出液。
 
　　（3）淋洗：液體*排凈后，依次用PBS緩沖液10ml、蒸餾水10ml，淋洗，流速為1-2滴/秒，棄掉流出液，抽干。
 
　?。?）洗脫：加入色譜級溶液，調(diào)節(jié)流速為1滴/秒，緩慢洗脫，收集全部洗脫液，用色譜級溶液定容至1ml（即為凈化后的樣品）。
 
　　③檢測
　　凈化后樣品可直接用HPLC（高效液相色譜法）、GC-MS（氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀）、ELISA（酶聯(lián)免疫吸附法）等方法進(jìn)行檢測。